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Yessica Magaliz Reyes Caballero (2); Alice Rocío Chávez (2); Andrea Alejandra Arrúa Alvarenga (1); Juliana Moura Mendes Arrúa (1); Man Mohan Kohli (2); Cinthia Carolina Cazal Martínez (1-2)
RESUMEN
Pyricularia grisea y Pyricularia oryzae están incluidas dentro del género Pyricula- ria, agente causal de enfermedades en arroz (Oryza sativa L.) Infectan también gramíneas como Triticum aestivum L., Avena sativa L etc. A pesar de la variedad de hospederos existe especificidad en cepas aisladas de arroz por presentarse infección solo en plantas muy próximas a esta (Lolium y Cebada). Esto puede relacionarse a la variabilidad genética que el presente trabajo evalúa mediante análisis de características morfológicas (crecimiento radial, esporulación y peso de micelio) sobre cepas de Pyricularia aisladas de trigo, avena y Bromus catharticus. Las cepas se sembraron en medio de cultivo Agar-Avena, y se incubaron a 25ºC con luz por siete días, posteriormente se evaluó el crecimiento radial y se raspó la placa para estimular la esporulación en cámara húmeda. Para conocer el peso del micelio, se sembraron bocados de los aislados en matraces conteniendo medio de cultivo preparado a base de caldo de papa y dextrosa. Los mismos se mantuvieron a 25ºC con luz y agitación constante (130 r. p. m) por siete días, luego se filtró, secó y pesó el micelio. Los datos fueron sometidos a análisis de varianza y comparación de medias con el test de Tuckey α=0,05mediante el programa InfoStat. Se determinó que no existe diferencia significativa en la esporulación de los aislados provenientes de trigo y avena, siendo significativa para la cepa proveniente de B. catharticus. En el crecimiento radial no se observó diferen- cias significativas. Para peso de micelio la diferencia fue significativa entre todos los aislados analizados. Con estos resultados se demuestra que estas variables no pueden emplearse como criterios únicos indicativos de variabilidad genética entre aislados. Se concluye que las características morfológicas tales como cre- cimiento radial, esporulación y peso micelial no pueden ser criterios únicos para estimar la variabilidad biológica existente entre aislados de Pyricularia, por lo que se hace necesario el uso de otras herramientas como marcadores moleculares que complementen estas características morfológicas.
INTRODUCCIÓN
El género de hongos Pyricularia (teleomorfo Magnaporthe) está compuesto por varias especies tales como, P. higginssi, P. zingiberi, P. zizaniaecola, P. commenicola, P. grisea y
- oryzae, siendo este último el agente causal de varias enfermedades en arroz (Oryza sativa L) tales como Pudrición del cuello de la espiga, y la más destructiva conocida como Rice Blast, esta se encuentra entre las diez enfermedades de origen fúngico que amenaza la seguridad e inocuidad alimentaria en todo el mundo. (Luo et al, 2013). Este género fúngico infecta además a otras gramíneas tales como Trigo (Triticum aestivum L.), avena (Avena sativa L.), cebada (Hordeum vulgare L.), centeno (Secale cereale L) etc. Lo cual demuestra la existencia de una amplia variedad de hospederos para este hongo. (Dias, et al. 2010). Una particularidad del género es que las especies
- grisea y P. oryzae, son prácticamente indistinguibles en cuanto a la morfología del conidio, peritecio y ascospora entre otros caracteres, lo cual podría ser un inconveniente al momento de caracterizar morfológicamente las cepas fúngicas (Klaubaul et al. 2014). A pesar del rango de hospederos amplio, se ha observado especificidad de hospederos para cepas de Pyricularia aisladas de arroz, ya que estas infectan solo a plantas muy próximas al arroz como Lolium y Cebada, en tanto que cepas aisladas de otras gramíneas son incapaces de infectar al arroz. (Klaubaul et al. 2014), Gutié- rrez, et al. 2015). Esto podría estar relacionado con la variabilidad biológica existente entre una cepa y otra. Esta variabilidad podría ser manifestada a través de los caracteres macroscópicos (aspecto del micelio, color, forma) y microscópicos (tamaño y forma del conidio) de la cepa. Con el objetivo de evaluar la variabilidad por medio de las características morfológicas se procedió al análisis de las siguientes variables: Crecimiento radial, esporulación y peso de micelio en cuatro cepas de Pyricularia (P14GTae019, P14GTae021, P14IAsh016 y P13CBch04) aisladas de tres hospederos distintos; trigo, Avena y Bromus catharticus respectivamente.
MATERIALES Y MÉTODOS
Las cepas fueron sembradas en medio Agar Avena con 1% de getamicina (por triplicado) y mantenidas para su crecimiento a una temperatura de 25ºC y luz continua durante ocho días. Posteriormente fueron evaluadas las variables de crecimiento radial y esporulación, registrando el radio de crecimiento presente en la placa para cada cepa. Para evaluar la esporulación se procedió al raspado de la placa y su posterior incubación en cámara húmeda por 7 días con el fin de estimular la formación de esporas en lasbcepas. El recuento de esporas se realizó con una cámara de Neubauer en microscopio óptico compuesto, el mismo fue realizado por triplicado. Para el análisis de peso micelial se sembró las cepas en un matraz Erlenmeyer conteniendo medio de cultivo líquido preparado a base de infusión de papa, dextrosa 2% y 1% de gentamicina, a una temperatura de 25ºC con luz y agitación constante (130 r. p. m) durante7 días. Se registraron los datos de peso de micelio posterior a una filtración y secado. Los datos obtenidos para las tres variables fueron sometidos a análisis de varianza y comparación de medias con el test de Tuckey α = 0,05 mediante el programa estadístico InfoStat.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
El análisis de medias determino que no existe diferencia significativa para la variable de esporulación (Tabla 1) en las cepas provenientes de trigo y avena, siendo significativa esta diferencia para la cepa proveniente de Bromus catharticus.
Tabla 1. Análisis de Medias para la variable esporulación en las cepas P14G- Tae019, P14GTae021, P14IAsh016 y P13CBch04 aisladas de tres hospederos distintos; trigo, Avena y B. catharticus respectivamente. San Lorenzo, Paraguay, 2016.
En cuanto al crecimiento radial y peso micelial, (Tablas 2 y 3) la prueba de Tuckey determino que tampoco existió diferencia significativa para el crecimiento radial entre las cepas provenientes de los tres hospederos, sin embargo, se observó diferencia en cuanto al peso del micelio entre las cuatro cepas analizadas.
Tabla 2. Análisis de Medias para la variable de Crecimiento Radial en las cepas P14GTae019, P14GTae021, P14IAsh016 y P13CBch04 aisladas de tres hospederos distintos; trigo, Avena y B. catharticus respectiva- mente. San Lorenzo, Paraguay, 2016.
Tabla 3. Análisis de Medias para la variable Peso Micelial en las cepas P14GTae019, P14GTae021, P14IAsh016 y P13CBch04 aisladas de tres hospederos dis- tintos; trigo, Avena y Bromus respectivamente. San Lorenzo, Paraguay, 2016.
Con estos resultados se demuestra que la esporulación, el crecimiento radial en placa y el peso del micelio no pueden ser empleados como criterio indicativo de variabilidad biológica entre cepas provenientes de hospederos diferentes. En cuanto para la variable peso de micelio, se resalta la diferencia significativa existente entre las cuatro cepas de Pyricularia, incluyendo a las dos cepas provenientes del mismo hospedero (P14G- Tae019 y P14GTae021), esto sugiere la posibilidad de emplear la variable como criterio de variabilidad entre cepas aisladas de un mismo hospedero. En un estudio efectuado por Bouvet en el año 2015, se evaluó los caracteres morfológicos y la esporulación de cepas de Pyricularia grisea aisladas de arroz, en el mismo quedo demostrado que estas características varían dentro de una misma cepa para un mismo hospedero, lo cual concuerda también con el resultado obtenido en el presente trabajo.
CONCLUSIÓN
Se concluye que las características morfológicas tales como crecimiento radial, es- porulación y peso micelial no pueden ser criterios únicos para estimar la variabili- dad biológica existente entre aislados de Pyricularia, por lo que se hace necesario el uso de otras herramientas como marcadores moleculares que complementen éstas características morfológicas.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
_ Bouvet. M 2015 Aislamiento y caracterización de Pyricularia grisea de variedades de arroz cultivadas en el Departamento San Javier1. Revista de la Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Nacional del Litoral (UNL) 1 – 4.
_ Dias. J, Santos. G, Anjos. L, Nakano. P & Ferreira. P 2010 Alta diversidade de raças fisiológicas de
Magnaporthe oryzae em áreas de arroz irrigado em Tocantins, Brasil Pesq. agropec. 45(3): 252-260
_ Chávez. R & Kholi. M. 2015. Hospederos alternativos de Magnaporthe grisea del trigo en Paraguay. Investig. Agraria 17(1)54-59
_ Gutiérrez. S & Cúndom. M. 2015 Pyricularia oryzae en cultivos de cebada en Corrientes (Argentina) Summa Phytopathol. 4 (4): 318-320
_ Klaubauf. S, Tharreau. D, Foumier.E, Groenewald. J, Crous. P, Vries.R & Lebrun. M. 2014 Studies in Mycology 79: 85-120
_ Luo. J & Zhang. N. 2013. Magnaporthiopsis and new genus in Magnaportaceae (Ascomycota). Mycologia 105: 1019-1029[/vc_column_text]