{"id":8398,"date":"2023-11-01T12:10:38","date_gmt":"2023-11-01T15:10:38","guid":{"rendered":"https:\/\/capeco.org.py\/?p=8398"},"modified":"2023-11-01T12:10:38","modified_gmt":"2023-11-01T15:10:38","slug":"conservacion-de-cepas-de-pyricularia-sp-por-tres-metodos-largo-plazo-alternativo-y-un-metodo-desarrollado-por-combinacion-de-metodos-alternativos-y-de-largo-plazo","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/capeco.org.py\/en\/2023\/11\/01\/conservacion-de-cepas-de-pyricularia-sp-por-tres-metodos-largo-plazo-alternativo-y-un-metodo-desarrollado-por-combinacion-de-metodos-alternativos-y-de-largo-plazo\/","title":{"rendered":"(Espa\u00f1ol) Conservaci\u00f3n de cepas de Pyricularia sp por tres m\u00e9todos; largo plazo, alternativo y un m\u00e9todo desarrollado por combinaci\u00f3n de m\u00e9todos alternativos y de largo plazo"},"content":{"rendered":"

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RESUMEN<\/h4>\n

La implementaci\u00f3n de m\u00e9todos de conservaci\u00f3n se hace indispensable para el es- tudio de microorganismos como hongos fitopat\u00f3genos. El objetivo del presente trabajo es evaluar el crecimiento radial de cepas de Pyricularia <\/em>sp. conservadas en Papel de filtro y Glicerol como crioprotector, para ello se llev\u00f3 a cabo un experi- mento en el Laboratorio de Biotecnolog\u00eda del Centro Multidisciplinario de in- vestigaciones Tecnol\u00f3gicas (CEMIT) con dos cepas de Pyricularia <\/em>sp (066M y 067M) aisladas de Digitaria horizontalis <\/em>y Brachiaria <\/em>sp. respectivamente. Las cepas fueron inoculadas en medio Agar-Avena y mantenidas a condiciones controladas de luz y temperatura (25\u00baC) por 7 d\u00edas. Posteriormente, se realiz\u00f3 su conservaci\u00f3n por los siguientes m\u00e9todos; Papel de filtro a -20\u00baC y Papel de filtro a -80\u00baC (con Glicerol). Para su Congelamiento con glicerol (80%v\/v), las cepas de Pyricularia <\/em>sp. se almacenaron a -80\u00baC. Luego de 12 meses de almacenamiento se proce- di\u00f3 a la reactivaci\u00f3n bajo condiciones controladas de luz y temperatura (25\u00baC). Se evalu\u00f3 el crecimiento radial durante 15 d\u00edas (las pruebas fueron realizadas por triplicado). Las cepas conservadas por los m\u00e9todos de congelamiento a -80\u00baC no presentaron crecimiento durante las observaciones realizadas, Por el contrario, con la conservaci\u00f3n en Papel de filtro a -20\u00baC pudo observarse crecimiento sin dife- rencias significativas entre las cepas. En conclusi\u00f3n, la de conservaci\u00f3n sobre Papel de filtro a -20\u00baC puede ser implementada para la recuperaci\u00f3n con \u00e9xito de cepas de Pyricularia <\/em>sp.<\/p>\n

INTRODUCCI\u00d3N<\/h4>\n

La implementaci\u00f3n de m\u00e9todos de conservaci\u00f3n se hace indispensable en las in- vestigaciones efectuadas con microorganismos como hongos o bacterias que gozan de inter\u00e9s econ\u00f3mico al ser causantes de varias enfermedades en cultivos agr\u00edcolas (Ladino et.al. 2016). A la fecha se han desarrollado varias t\u00e9cnicas cuyo fin es la conservaci\u00f3n de un material viable con caracteres casi inalterados y similares al cultivo inicialmente aislado. Estos m\u00e9todos en base a factores como tiempo y ca- racter\u00edsticas fisiol\u00f3gicas del microorganismo se agrupan en m\u00e9todos de corto y lar- go plazo y en m\u00e9todos alternativos. (Parra et al, 2006, Pinz\u00f3n & Gutierrez, 2009) Entre los m\u00e9todos considerados de largo plazo, as\u00ed denominados por el tiempo de conservaci\u00f3n largo (hasta 30 a\u00f1os dependiendo del microorganismo) se encuen- tran la congelaci\u00f3n, en la cual se utiliza un criprotector (glicerol, dimetilsulfoxido, leche descremada, glucosa, lactosa, manitol etc.), para mantener las c\u00e9lulas inalteradas y conservadas a baja temperatura (-20\u00baC a -140\u00baC) y la liofilizaci\u00f3n que es b\u00e1sicamente la deshidrataci\u00f3n por sublimaci\u00f3n del agua (Ladino et al. 2016). Los materiales liofilizados pueden ser conservados a temperaturas comprendidas entre los 18\u00baC y 25\u00baC. (Arencibia et al, 2014). Estos m\u00e9todos requieren de equi- pamientos costosos para mantener las condiciones adecuadas, es por ello que la conservaci\u00f3n a corto plazo y otros m\u00e9todos alternativos podr\u00edan resultar eficaces para el prop\u00f3sito, pero presenta la desventaja que las c\u00e9lulas no pueden permanecer almacenadas indefinidamente. Entre las t\u00e9cnicas es posible citar al subcultivo de microorganismo, con la cual se mantiene la actividad metab\u00f3lica conservando al organismo en medio de cultivo fresco y nutritivo a temperaturas comprendidas en- tre los 4\u00baC. La suspensi\u00f3n del material a conservar en agua destilada y est\u00e9ril bajo las mismas condiciones es otra opci\u00f3n de conservaci\u00f3n a corto plazo (Mart\u00ednez et al, 2009). Cuando los m\u00e9todos antes mencionados no representan una opci\u00f3n para emplear sobre el microorganismo, es posible emplear los m\u00e9todos alternativos. Se basan en la paralizaci\u00f3n de las actividades metab\u00f3licas por desecaci\u00f3n del agua que a diferencia con la liofilizaci\u00f3n (deshidrataci\u00f3n celular) este m\u00e9todo solo elimina el agua disponible para las c\u00e9lulas, es posible citar a la desecaci\u00f3n en papel de fil- tro y sobre sustratos inertes (arena, silica gel, algod\u00f3n, gelatina, vidrio, porcelana, alginato, sales etc.) (Godinez et al, 2008). Las temperaturas de almacenamientos son variadas, comprendidas entre 4\u00baC y -18\u00baC, pudi\u00e9ndose almacenar incluso a<\/p>\n

-80\u00baC si se emplea alginato como sustrato inerte. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la viabilidad de cepas de Pyricularia <\/em>sp. conservadas en dos m\u00e9todos alternativos (papel de filtro y papel de filtro con glicerol como crioprotector) y en un m\u00e9todo a largo plazo (congelamiento con glicerol como crioprotector).<\/p>\n

METODOLOG\u00cdA<\/h4>\n

El ensayo fue llevado a cabo en el Laboratorio de Biotecnolog\u00eda del Centro Multi- disciplinario de investigaciones Tecnol\u00f3gicas de la Direcci\u00f3n General de Investiga- ci\u00f3n Cient\u00edfica y Tecnol\u00f3gica de la Universidad Nacional de Asunci\u00f3n (CEMIT- DGICT-UNA). Se trabaj\u00f3 con dos cepas de Pyricularia<\/em> sp. (066M y 067M) aisladas de Digitaria horizontalis <\/em>y Brachiaria <\/em>sp. respectivamente. Las cepas del hongo fueron sembradas en medio Agar-Avena y mantenidas a condiciones de luz y temperatura adecuadas para su crecimiento durante 7 d\u00edas. Posteriormente, se realiz\u00f3 la conser- vaci\u00f3n de los materiales por los siguientes m\u00e9todos; Conservaci\u00f3n en papel de filtro (PF) a -20\u00baC, para el cual fueron trasferidos explantes de cada cepa sobre papel de filtro est\u00e9ril en medio Papa-Dextrosa-Agar en condiciones adecuadas para el creci- miento, 8 d\u00edas despu\u00e9s, el papel de filtro con las cepas crecidas, se sec\u00f3 a temperatura ambiente (25\u00baC), dentro de placas vac\u00edas y est\u00e9riles para su posterior almacenamien- to a -20\u00baC y a \u2013 80\u00baC con Glicerol (80% v\/v) como crioprotector (PF-G80). Para la t\u00e9cnica de conservaci\u00f3n por Congelamiento con glicerol (80%v\/v) (CG80) como crioprotector a -80\u00baC, se transfirieron explantes de las cepas de Pyricularia <\/em>sp. a tubos con glicerol (80% v\/v) directamente desde el medio Agar-Avena. Las cepas fueron mantenidas bajo las condiciones de conservaci\u00f3n durante 12 meses, posteriormente se procedi\u00f3 a la reactivaci\u00f3n de las mismas en medio Agar-Avena bajo condiciones controladas de luz y temperatura (22\u00baC – 25\u00baC). Se evalu\u00f3 el crecimiento radial en cent\u00edmetros (cm) durante 15 d\u00edas a intervalos de 5 d\u00edas realiz\u00e1ndose un total de tres observaciones. Se estimul\u00f3 la esporulaci\u00f3n realizando un raspado a la placa en c\u00e1- mara h\u00fameda, manteniendo esta condici\u00f3n por tres d\u00edas. Posteriormente se eval\u00fao la presencia de esporas al Microscopio \u00f3ptico.<\/p>\n

RESULTADOS Y DISCUSI\u00d3N<\/h4>\n

La reactivaci\u00f3n de las cepas conservadas durante un a\u00f1o en tres m\u00e9todos diferentes, arroj\u00f3 resultados no esperados debido a que las cepas conservadas por los m\u00e9todos de congelamiento a -80\u00baC (PF-G80 y G80) en donde se emple\u00f3 Glicerol como criopro- tector no presentaron di\u00e1metro de crecimiento durante las observaciones realizadas a lo largo del ensayo (Figura 1), lo cual implica que el hongo ha perdido la viabilidad en el transcurso del tiempo y no pudo recuperarse. El glicerol o glicerina tiene la funci\u00f3n de preservar la integridad celular a temperaturas muy bajas con la capacidad de atravesar la membrana celular y evitar as\u00ed efectos perjudiciales del aumento en la concentraci\u00f3n de soluto generado por el congelamiento del agua (Arencibia et al, 2008).<\/p>\n

Figura 1. <\/strong>Evaluaci\u00f3n de la reactivaci\u00f3n de las cepas 066M y 067M de Pyricularia sp<\/em>. en Agar-Avena por los m\u00e9todos de conservaci\u00f3n PF (A-D), PF- G80 (B-E) y G80(C-F), por triplicado cada 5 d\u00edas por un intervalo de 15 d\u00edas. San Lorenzo, Paraguay, 2017.<\/u><\/p>\n

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Se han realizado varios estudios y se lo ha catalogado como un compuesto no toxi- co para las c\u00e9lulas, sin embargo, es posible que la concentraci\u00f3n empleada (80%v\/v) en este trabajo en comparaci\u00f3n con otros haya resultado toxica para el microor- ganismo (Malik, 1996, Ladino et al, 2016, C\u00e1rdenas, 2010). En base a esto no se puede descartar por completo la t\u00e9cnica empleando este crioprotector, m\u00e1s bien es indispensable realizar estudios para encontrar la concentraci\u00f3n adecuada de glice- rol para su implementaci\u00f3n dentro de la t\u00e9cnica de congelamiento.<\/p>\n

Por el contrario, con la conservaci\u00f3n en papel de filtro a -20\u00baC se pudo observar crecimiento en las dos cepas con caracter\u00edsticas macromorfologicas de aspecto y textura de la colonia correspondiente al g\u00e9nero del hongo fitopat\u00f3geno, tal como se observa en la figura 1 y tabla 1. Este m\u00e9todo alternativo de conservaci\u00f3n puede ser empleado con \u00e9xito para la recuperaci\u00f3n de las cepas de Pyricularia <\/em>sp.<\/p>\n

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Tabla 1.<\/strong> Crecimiento de las cepas de Pyricularia <\/em>sp. <\/em>Conservadas durante 12 meses en tres m\u00e9todos diferentes; Papel de Filtro (PF), Glicerol 80% (G80) y una combinaci\u00f3n de Papel de Filtro con Glicerol (PF-G80). Las cepas fueron reactivadas en Agar-Avena y evaluadas durante 15 d\u00edas.<\/u> San Lorenzo, Paraguay, 2017.        <\/u><\/p>\n

\"\"<\/p>\n

En cuanto a la esporulaci\u00f3n, esta fue escasa en las condiciones provistas dentro de la c\u00e1mara h\u00fameda para ambas cepas, es posible que sea necesario ajustar algunos factores importantes como humedad elevada y la temperatura para estimular con \u00e9xito la esporulaci\u00f3n.<\/p>\n

CONCLUSI\u00d3N<\/h4>\n

Los m\u00e9todos de conservaci\u00f3n (Congelamiento con crioprotector a -80\u00baC y el m\u00e9todo alternativo generado por la combinaci\u00f3n de papel de filtro y criopro- tector a -80\u00baC) resultaron inadecuados para la conservaci\u00f3n de cepas de Pyri<\/em>cularia sp. <\/em>Se hace necesario evaluar la concentraci\u00f3n ideal del crioprotector para implementarlo dentro de las t\u00e9cnicas. La t\u00e9cnica alternativa de conserva- ci\u00f3n sobre papel de filtro a -20\u00baC puede ser implementada para la recuperaci\u00f3n con \u00e9xito de cepas de Pyricularia sp<\/em>.<\/p>\n

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REFERENCIAS BIBLIOGR\u00c1FICAS<\/h4>\n

_ Arencibia, D. Fern\u00e1ndez, L & Men\u00e9ndez, R. 2008. M\u00e9todos generales de conservaci\u00f3n de microorganismos. Finlay Ediciones. Colombia, p1 -14<\/p>\n

_ C\u00e1rdenas, Y.; D. Rodr\u00edguez; O. El\u00f3segui. 2010. Trichoderma harzianumRifai cepa A-34. M\u00e9todos de conservaci\u00f3n y evaluaci\u00f3n de sus formulados, tesis en opci\u00f3n al t\u00edtulo de Licenciado en Microbiolog\u00eda, Facultad de Biolog\u00eda, Universidad de La Habana, Cuba.<\/p>\n

_ Godinez, S. Calder\u00f3n, M. 2008. M\u00e9todos Alternativos para la conservaci\u00f3n de Hongos Filamentosos. Ciencia y Tecnolog\u00eda de Alimentos, Cuba, v 18 n2 p 31-37<\/p>\n

_ Malik K.A. 1996Freezedrying of microorganismsusing a simple apparatus. TechnicalIn- formationfor Culture CollectionsCurators in DevelopingCountries. EducationCommit- tee. U\/W, 29-32. K. A. Malik (ed), p 256-260<\/p>\n

_ Mart\u00ednez, A. Le\u00f3n, M      & Gonz\u00e1lez, G. 2009. Conservaci\u00f3n de cepas de Candidauti- lis <\/em>en agua destilada est\u00e9ril. Instituto Cubano de Derivados de la Ca\u00f1a de Az\u00facar, Cuba, v XLIII n2 p 47-50<\/p>\n

_ Ladino, E. Rubio, J &Chacin, C. 2016. Evaluaci\u00f3n de dos m\u00e9todos de conservaci\u00f3n de hon- gos filamentosos pat\u00f3genos de palma de aceite. Centro Agr\u00edcola, Colombia, v 43 n p 36-41<\/p>\n

_ Parra, S. M. P\u00e9rez, M. Bernal. Z, Suares& D. Montoya.2006. Implementaci\u00f3n y evalua- ci\u00f3n de dos m\u00e9todos de conservaci\u00f3n y generaci\u00f3n de la base de datos del banco de cepas y genes del instituto de Biotecnolog\u00eda de la Universidad Nacional de Colombia, Colom- bia, v4 n5 p 1-116<\/p>\n

_ Pinz\u00f3n, A. Guti\u00e9rrez, Y. Bustamante, S. & Buitrago, S. 2009. Evaluaci\u00f3n de m\u00e9todos para la conservaci\u00f3n de hongos fitopat\u00f3genos del \u00f1ame (Dioscoreasp.). Revista Colombiana de Biotecnolog\u00eda, Colombia, v XI n 2 p 8-18<\/p>","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

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